蛋白酶K是什麼☁││·↟?它的作用有哪些☁││·↟?
瀏覽次數·↟↟••:220釋出日期·↟↟••:2022-10-22
蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶╃•▩✘。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵╃•▩✘。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性╃•▩✘。由於蛋白酶K在尿素和SDS中穩定☁╃,還具有降解天然蛋白質的能力☁╃,因而它應用很廣泛☁╃,包括製備脈衝電泳的染色體DNA☁╃,蛋白質印跡以及去除DNA和RNA製備中的核酸酶╃•▩✘。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml╃•▩✘。在較廣的pH範圍內(pH4-12.5)均有活性╃•▩✘。
蛋白酶K的作用·↟↟••:
蛋白酶K在原位雜交技術中通常用於雜交前的處理☁╃,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用☁╃,以增加探針與靶核酸結合的機會☁╃,提高雜交訊號.但蛋白酶K的濃度過高☁·、消化時間過長或孵育溫度過高時☁╃,都會對細胞的結構有一定的破壞☁╃,導致組織切片的脫落☁╃,細胞核的消失☁╃,從而影響雜交結果╃•▩✘。EDTA緩衝液可以替代蛋白酶K的作用☁╃,解決上述出現的問題☁╃,並能達到理想的染色效果╃•▩✘。
蛋白酶K的應用比較廣泛☁╃,它可以消化包圍靶DNA蛋白☁╃,因此使用蛋白酶K能夠增加探針與靶核酸結合的機會增強雜交訊號☁╃,但在使用蛋白酶K時要主要使用的濃度☁╃,過高或者過低都會破壞細胞的結構☁·、核消失等影響試驗結果╃•▩✘。
現在已廣泛應用在皮革☁·、毛皮☁·、絲綢☁·、醫藥☁·、食品☁·、釀造等方面╃•▩✘。皮革工業的脫毛和軟化已大量利用蛋白酶☁╃,既節省時間☁╃,又改善勞動衛生條件╃•▩✘。蛋白酶還可用於蠶絲脫膠☁·、肉類嫩化☁·、酒類澄清╃•▩✘。